Tampón de electroforesis de ácido tris-bórico

La electroforesis en gel de agarosa es un método convencional para separar e identificar ácidos nucleicos en laboratorios de biología molecular. Los ácidos nucleicos son electrolitos anfóteros con un punto isoeléctrico de pH 2-2,5. En los tampones de electroforesis convencionales (pH de aproximadamente 8,5), las moléculas de ácido nucleico están cargadas negativamente. La carga se mueve hacia el polo positivo en el campo eléctrico. Mediante la tecnología de electroforesis, se pueden separar moléculas de ARN de diferentes tamaños y conformaciones y, al observar el número, el tamaño y la forma de las bandas, se puede juzgar la integridad de las moléculas de ARN. En este proceso, la función principal del tampón de electroforesis es mantener el pH y hacer que la solución tenga una determinada conductividad. TAE (tampón de ácido tris-acético) y TBE (tampón de electroforesis de ácido tris-bórico) son tampones de uso común. ¿Cuál es la diferencia entre ellos? TAE (tampón Tris-acetato) Ventaja: ① Para fragmentos de ADN de más de 13 kb, el tampón TAE puede lograr mejores resultados de separación. ② En el tampón TAE, el estado superenrollado del ADN puede mantener mejor su verdadera masa molecular relativa durante la electroforesis. ③Adecuado para recuperar fragmentos de ADN y posteriores reacciones de digestión enzimática, etc. defecto:   La capacidad tampón es pequeña y el tampón TAE puede perder gradualmente su capacidad tampón de pH durante la electroforesis a largo plazo, lo que provoca cambios en el valor del pH. TBE (tampón de electroforesis de ácido bórico-TRIS) Ventaja: ① La capacidad de amortiguación es relativamente mayor, el valor del pH se puede mantener constante incluso durante la electroforesis a largo plazo y no es fácil provocar un sobrecalentamiento en el tanque de electroforesis. ② Adecuado para la separación electroforética de fragmentos más pequeños, como fragmentos de menos de 1 kb. Su alta resolución facilita la distinción de moléculas de diferentes tamaños, aumentando así la precisión de los experimentos. defecto: El componente de ácido bórico contenido puede afectar la eficiencia de recuperación de ARN y ADN y los experimentos de reacción enzimática posteriores.