Una guía paso a paso para la electroforesis de ácidos nucleicos

Introducción

La electroforesis de ácidos nucleicos es una técnica fundamental en biología molecular que se utiliza para separar fragmentos de ADN o ARN según su tamaño. Este método se basa en un campo eléctrico para mover los ácidos nucleicos con carga negativa a través de una matriz de gel, generalmente agarosa o poliacrilamida. Los fragmentos separados pueden visualizarse y documentarse mediante un sistema de documentación de gel, como el YB-GD1 de Yanbiotech, para un análisis preciso. A continuación, se detalla un protocolo paso a paso para realizar la electroforesis de ácidos nucleicos.

Materiales necesarios

1. Preparación del gel:

• Polvo de agarosa (para electroforesis en gel de agarosa)
• Tampón TAE (Tris-Acetato-EDTA) o TBE (Tris-Borato-EDTA)
• Bandeja y peine para colada de gel
• Bromuro de etidio (EB) o alternativas más seguras como SerRed.

2. Preparación de la muestra:

• muestras de ADN/ARN
• Carga de tinte
• Escalera de ADN (tamaño estándar)

3. Configuración de la electroforesis:

• Cámara de electroforesis
• Fuente de alimentación
• Sistema de documentación de gel Yanbiotech YB-GD1 (o transiluminador UV para visualización)

Procedimiento paso a paso

1. Preparación del gel de agarosa

1.1: Preparar el tampón (normalmente 1X TAE o TBE).

1.2: Pese la cantidad adecuada de agarosa (por ejemplo, 1 % de agarosa para la separación de ADN estándar).

1.3: Mezclar la agarosa con el tampón y calentar hasta que esté completamente disuelta (en el microondas durante 30-60 segundos).

1.4: Enfríe ligeramente la solución (~60 °C) y luego agregue el tinte de ADN (por ejemplo, EB o SerRed).

1.5: Vierta el gel en una bandeja de colada con un peine insertado y deje que se solidifique (~20-30 min).

2. Carga de las muestras

2.1: Retire con cuidado el peine y coloque el gel en la cámara de electroforesis.

2.2: Llene la cámara con suficiente tampón para cubrir el gel.

2.3: Mezclar muestras de ADN con el tinte de carga (para rastrear la migración).

2.4: Cargue las muestras en los pocillos, incluida una escalera de ADN como referencia de tamaño.

3. Ejecución de la electroforesis

3.1: Conecte los electrodos (negativo al lado de la muestra, positivo al extremo opuesto).

3.2: Aplicar voltaje (normalmente 80-120 V para geles de agarosa).

3.3: Ejecutar hasta que el frente del tinte migre ¾ de la longitud del gel (~30-60 min, dependiendo del tamaño del fragmento).

4. Visualización y documentación de resultados con YB-GD1

4.1: Apague la fuente de alimentación y retire con cuidado el gel.

4.2: Coloque el gel en el sistema de documentación de gel Yanbiotech YB-GD1 para obtener imágenes de alta resolución.

• El YB-GD1 ofrece excitación LED blanca y UV, lo que permite la visualización de SerRed y otras tinciones de ácidos nucleicos comunes.
• Su cámara CCD de alta sensibilidad garantiza una detección de bandas clara y precisa.
• El software adjunto permite el análisis automático de bandas y la estimación del tamaño comparando muestras con la escalera de ADN.

4.3: Guarde y exporte la imagen del gel para mayor documentación y publicación.

Consejos para la solución de problemas

• Manchas: Puede indicar ADN degradado o demasiada muestra cargada.
• Sin bandas: verificar el método de tinción, las condiciones de electroforesis o la cantidad de ADN.
• Bandas desiguales: asegúrese de que el gel se haya vertido de manera uniforme y que la concentración del tampón sea la correcta.
• Mala calidad de imagen (si usa YB-GD1): ajuste el tiempo de exposición o la configuración de enfoque en el software.

Conclusión

La electroforesis de ácidos nucleicos es una técnica sencilla pero potente para analizar ADN y ARN. Siguiendo estos pasos cuidadosamente y utilizando el Sistema de Documentación en Gel YB-GD1 de Yanbiotech, los investigadores pueden lograr una visualización de alta calidad, una determinación precisa del tamaño y una documentación profesional de fragmentos de ácidos nucleicos. Este método se utiliza ampliamente en clonación, verificación por PCR y huella genética, lo que lo hace esencial para los laboratorios de biología molecular.

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