Kit ELISA de IL-17A humana (interleucina 17A)

I. Información del producto:

Este kit ELISA se basa en un formato de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) tipo sándwich. Cada pocillo de la microplaca suministrada se ha prerrecubierto con un anticuerpo de captura dirigido contra la IL-17A humana. Tras añadir los estándares o las muestras, el antígeno diana se une al anticuerpo inmovilizado. A continuación, se introduce un anticuerpo de detección marcado con biotina específico para la IL-17A humana, seguido de un conjugado de avidina-peroxidasa de rábano picante (HRP). Tras la incubación y un lavado para eliminar cualquier material no unido, se dispensa la solución de sustrato en los pocillos. Solo en los pocillos con IL-17A humana se desarrolla un color azul, formando un complejo con el anticuerpo biotinilado y la avidina-HRP. La reacción se detiene con una solución ácida, cambiando el color a amarillo. La absorbancia se mide a 450 nm ± 2 nm, siendo la densidad óptica (DO) directamente proporcional a la concentración de IL-17A humana. Las concentraciones de las muestras se determinan comparando sus valores de DO con una curva estándar.

II.Protocolo de prueba de muestra:

1. Se recomienda utilizar muestras frescas sin un almacenamiento prolongado. De lo contrario, podrían producirse la degradación y desnaturalización de las proteínas, lo que podría generar resultados erróneos.

2. Solo nos responsabilizamos del kit en sí, pero no de las muestras consumidas durante el ensayo. Los usuarios deben calcular la cantidad de muestras que se pueden utilizar en toda la prueba. Por favor, reserve suficientes muestras con antelación.

3. El rango de detección del kit no es equivalente al rango de concentración del analito en la muestra. Se recomienda consultar referencias, realizar experimentos preliminares o solicitar asistencia técnica para estimar la concentración del analito en la muestra. Si la concentración del analito en la muestra es demasiado alta o demasiado baja, se debe realizar una dilución o concentración adecuada.

4. Si el tipo de muestra no está incluido en el manual, se sugiere un experimento preliminar para verificar la validez.

III. Preparación de reactivos:

1. Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente (18-25 ℃) antes. Si el kit no se utilizará en un ensayo, solo saque las tiras y reactivos necesarios para el experimento actual y guarde las tiras y reactivos restantes en las condiciones requeridas.

2. Tampón de lavado: Diluya 30 ml de tampón de lavado concentrado con 720 ml de agua desionizada o destilada para preparar 750 ml de tampón de lavado. Nota: Si se han formado cristales en el concentrado, caliéntelo en un baño de agua a 40 °C y mézclelo suavemente hasta que los cristales se disuelvan por completo.

3. Solución de trabajo estándar:

① Centrifugar: Centrifugar el estándar a 10 000×g durante 1 minuto.

② Añada 1 ml de estándar de referencia y diluyente de muestra, deje reposar 10 minutos y agítelo suavemente varias veces. Una vez disuelto por completo, mézclelo bien con una pipeta. Esta reconstitución produce una solución de trabajo de 500 pg/ml.
③ Dilución seriada: Tome 7 tubos EP y añada 250 μL de solución de referencia y tampón de dilución de muestra a cada uno (el volumen se puede ajustar según el uso real, p. ej., 500 μL/tubo). Transfiera 250 μL de la solución de referencia de 500 pg/mL al primer tubo y mezcle bien para obtener la solución de referencia de 250 pg/mL. Continúe la dilución paso a paso hasta el penúltimo tubo. Este último servirá como blanco y no se debe transferir solución del penúltimo. La solución de referencia debe prepararse y usarse inmediatamente.

4. Solución de trabajo de Ab de Detección Biotinilado: Calcule la cantidad necesaria antes del experimento (100 μL/pocillo). Para la preparación, se debe preparar una cantidad ligeramente superior a la calculada. Centrifugue el Ab de Detección Biotinilado Concentrado a 800 × g durante 1 min y, a continuación, diluya el Ab de Detección Biotinilado Concentrado 100 × hasta obtener una solución de trabajo 1 × con Diluyente de Ab de Detección Biotinilado (Ab de Detección Biotinilado Concentrado: Diluyente de Ab de Detección Biotinilado = 1:99).

5. Solución de trabajo de conjugado de HRP: Calcule la cantidad necesaria antes del experimento (100 μL/pocillo). Para la preparación, se debe preparar una cantidad ligeramente superior a la calculada. Centrifugue el conjugado de HRP concentrado a 800 × g durante 1 min y luego diluya el conjugado de HRP concentrado 100 × a una solución de trabajo 1 × con diluyente de conjugado de HRP (conjugado de HRP concentrado: diluyente de conjugado de HRP = 1:99).

6. Consejos para la operación experimental

① Las soluciones deben agregarse al fondo del pocillo de la microplaca ELISA, evitando tocar la pared interior y provocar la formación de espuma tanto como sea posible.

② Prepare las tiras reactivas para su uso inmediatamente después del lavado. No permita que los pocillos se sequen.

③ Después de añadir el reactivo de sustrato, el tiempo de reacción puede acortarse o prolongarse según el cambio de color real, pero no más de 30 minutos.

④ La adición de la solución de detención debe realizarse en el mismo orden que la solución de sustrato.

IV. Procedimiento de ensayo:

V. Aviso:
Solo para investigación en ciencias de la vida