Kit ELISA de ECF/CCL11 (factor quimiotáctico de eosinófilos) humano

I. Información del producto:

Este kit ELISA utiliza el método de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) tipo sándwich. Los pocillos de la microplaca, prerrecubiertos, se recubren con un anticuerpo de captura específico para ECF/CCL11 humano. Tras añadir estándares o muestras a los pocillos, el antígeno diana se une al anticuerpo inmovilizado. A continuación, se introduce un anticuerpo de detección marcado con biotina específico para ECF/CCL11 humano, seguido de un conjugado de avidina-peroxidasa de rábano picante (HRP). Tras la incubación y el lavado para eliminar los componentes no unidos, se añade la solución de sustrato. Solo se observa una coloración azul en los pocillos que contienen ECF/CCL11 humano, el anticuerpo de detección biotinilado y el conjugado de avidina-HRP. La reacción se detiene con la solución de parada, tornándose amarilla. La densidad óptica (DO) se mide a 450 nm ± 2 nm, lo que se correlaciona directamente con la concentración de ECF/CCL11 humano. Las concentraciones de las muestras se determinan comparando sus valores de DO con una curva estándar.

II.Protocolo de prueba de muestra:

1. Se recomienda utilizar muestras frescas sin almacenamiento prolongado para la prueba. De lo contrario, puede producirse degradación y desnaturalización de proteínas en dichas muestras y, en última instancia, arrojar resultados erróneos.

2. Solo somos responsables del kit en sí, pero no de las muestras consumidas durante el ensayo. Los usuarios deben calcular la cantidad posible de muestras utilizadas en toda la prueba. Reserve suficientes muestras con anticipación.

3. El rango de detección del kit no es equivalente al rango de concentración del analito en la muestra. Se recomienda consultar referencias, realizar experimentos preliminares o buscar soporte técnico para estimar la concentración del analito en la muestra. Si la concentración del analito en la muestra es demasiado alta o demasiado baja, se debe realizar una dilución o concentración adecuada de la muestra.

4. Si el tipo de muestra no está incluido en el manual, se sugiere un experimento preliminar para verificar la validez.

III. Preparación de reactivos:

1. Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente (18-25 ℃) antes. Si el kit no se utilizará en un ensayo, solo saque las tiras y reactivos necesarios para el experimento actual y guarde las tiras y reactivos restantes en las condiciones requeridas.

2. Tampón de lavado: diluya 30 ml de tampón de lavado concentrado con 720 ml de agua desionizada o destilada para preparar 750 ml de tampón de lavado. Nota: si se han formado cristales en el concentrado, caliéntelo en un baño de agua a 40 ℃ y mézclelo suavemente hasta que los cristales se hayan disuelto por completo.

3. Solución de trabajo estándar:

① Centrifugar: centrifugar el estándar a 10 000 × g durante 1 minuto.

② Agregue 1 ml de estándar de referencia y diluyente de muestra, déjelo reposar durante 10 minutos e inviértalo suavemente varias veces. Después de que se disuelva completamente, mézclelo bien con una pipeta. Esta reconstitución produce una solución de trabajo de 1000 pg/mL.
③Dilución en serie: Tome 7 tubos EP, agregue 250 μL de estándar de referencia y tampón de dilución de muestra a cada tubo (el volumen se puede ajustar según el uso real, por ejemplo, 500 μL/tubo). Transfiera 250 μL de la solución de trabajo estándar de 1000 pg/mL al primer tubo y mezcle bien para obtener la solución de trabajo estándar de 500 pg/mL. Continúe la dilución paso a paso hasta el segundo al último tubo. El último tubo servirá como blanco y no se debe transferir ninguna solución del segundo al último tubo. La solución de trabajo estándar debe prepararse recién y usarse de inmediato.

4. Solución de trabajo de Ab de detección biotinilado: Calcule la cantidad requerida antes del experimento (100 μL/pocillo). En la preparación, se debe preparar un poco más de lo calculado. Centrifugue el Ab de detección biotinilado concentrado a 800 × g durante 1 min, luego diluya el Ab de detección biotinilado concentrado 100 × a 1 × solución de trabajo con diluyente de Ab de detección biotinilado (Ab de detección biotinilado concentrado: Diluyente de Ab de detección biotinilado = 1:99).

5. Solución de trabajo de conjugado de HRP: Calcule la cantidad requerida antes del experimento (100 μL/pocillo). En la preparación, se debe preparar un poco más de lo calculado. Centrifugue el conjugado de HRP concentrado a 800 × g durante 1 minuto, luego diluya el conjugado de HRP concentrado 100 × a una solución de trabajo 1 × con diluyente de conjugado de HRP (conjugado de HRP concentrado: diluyente de conjugado de HRP = 1:99).

6. Consejos para la operación experimental

①Las soluciones deben agregarse al fondo del pocillo de la microplaca ELISA, evitando tocar la pared interior y provocar la formación de espuma tanto como sea posible.

②Utilice las tiras analizadas inmediatamente después del paso de lavado. No permita que los pocillos se sequen.

③Después de agregar el reactivo de sustrato, el tiempo de reacción se puede acortar o extender según el cambio de color real, pero no más de 30 minutos.

④La adición de la solución de detención debe realizarse en el mismo orden que la solución de sustrato.

IV. Procedimiento de ensayo:

V. Aviso:
Solo para investigación en ciencias de la vida