Tampón de lisis RIPA de alta eficiencia para tejidos y células

Introducción del producto

Tampón de lisis RIPA Es una solución de lisis rápida tradicional para células y tejidos. Se presenta en diversas formulaciones, clasificadas principalmente como fuertes, medias y débiles según su intensidad de lisis. El tampón de lisis RIPA fuerte es adecuado para lisar tejidos y células y obtener muestras de proteínas para aplicaciones convencionales como PAGE y Western blot, donde no se requiere una estricta preservación de la actividad proteica. Los componentes principales de este producto incluyen Tris-HCl 50 mM (pH 7,4), NaCl 150 mM, EDTA-2Na 1 mM, Triton X-100 al 1 %, desoxicolato de sodio al 1 % y SDS al 0,1 %. Es aplicable a tejidos y células animales o vegetales, y también puede utilizarse para muestras fúngicas o bacterianas.

Especificaciones del producto

Este producto utiliza una sustancia con propiedades reductoras comparables al ditiotreitol (DTT) o al β-mercaptoetanol (que tiene un olor fuerte), pero es inodoro y presenta una mayor estabilidad en soluciones acuosas. Su rendimiento no muestra diferencias significativas con respecto a los tampones de carga de proteínas convencionales para SDS-PAGE, lo que hace que los procedimientos de carga de proteínas sean más seguros y saludables.

Almacenamiento

Transportado con bolsas de hielo (hielo húmedo); almacenado a -20 °C, válido por 12 meses.

Paso de operación

Prepare los inhibidores de proteasas por separado. Estos deben añadirse al tampón de lisis RIPA (fuerte) inmediatamente antes de su uso. Se recomienda utilizar G2006, G2007, G2008 o productos similares para prevenir la degradación de proteínas. En los procedimientos que se describen a continuación, «tampón de lisis RIPA (fuerte)» se refiere al tampón que ya contiene los inhibidores de proteasas.

Para muestras de tejido:
1. Enjuague el trozo de tejido con PBS preenfriado para eliminar los contaminantes de sangre y tritúrelo en fragmentos finos en un homogeneizador.

2. Añada 10 volúmenes (en relación con la masa del tejido) de tampón de lisis RIPA (fuerte) y homogeneice a baja temperatura (se recomienda el homogeneizador de tejidos de alta velocidad YB-HL). Nota: La cantidad de tampón de lisis RIPA (fuerte) utilizada puede seguir, en general, una proporción aproximada de 500 µL por cada 50 mg de tejido. Si el tejido tiene un bajo contenido proteico, se puede reducir la cantidad de tampón de lisis para aumentar la concentración de proteínas en el extracto crudo.

3. Transfiera el homogeneizado a un tubo de centrífuga de 1,5 mL y agite en vórtex. Incube en hielo durante 30 minutos, pipeteando repetidamente cada 10 minutos para asegurar la lisis completa de las células del tejido.

4. Centrifugar a 12.000×g durante 5 minutos. Recoger el sobrenadante, que es la solución de proteína total.

Para muestras de células adherentes:

1. Lavar las células con PBS 2-3 veces, aspirando completamente el líquido residual después del último lavado.

2. Añada tampón de lisis RIPA (fuerte) a la placa o matraz de cultivo celular a razón de 250 µL por pocillo de una placa de 6 pocillos. Agite suavemente la placa o el matraz durante 3-5 minutos para asegurar que el tampón de lisis entre en contacto completo con las células.

3. Raspe las células con un raspador celular y recójalas en un tubo de centrífuga.

4. Lise las células en hielo durante 30 minutos.

5. Centrifugar a 12.000 × g durante 5 minutos. Recoger el sobrenadante, que es la solución de proteína total.

Para muestras de células en suspensión:

1. Recoger las células por centrifugación.

2. Mezcle el sedimento celular con tampón de lisis RIPA (fuerte) en una proporción correspondiente a 250 µL por pocillo de una placa de 6 pocillos y agite en vórtex.

3. Incubar en hielo durante 30 minutos, pipeteando hacia arriba y hacia abajo varias veces cada 10 minutos para asegurar la lisis celular completa.

4. Centrifugar a 12.000×g durante 5 minutos. Recoger el sobrenadante, que es la solución de proteína total.

Para muestras bacterianas o fúngicas:

1. Tomar 1 mL de suspensión microbiana, centrifugar para eliminar el sobrenadante, lavar una vez con PBS y eliminar completamente el líquido. Agitar en vórtex para dispersar el sedimento lo máximo posible.

2. Agregue 100-200 µL de tampón de lisis RIPA (fuerte) y agite suavemente en vórtex para mezclar bien las células microbianas con el tampón de lisis.

3. Incubar en hielo durante 10 minutos, pipeteando hacia arriba y hacia abajo varias veces cada 2 minutos para asegurar la lisis microbiana completa.

4. Centrifugar a 12.000×g durante 5 minutos. Recoger el sobrenadante, que es la solución de proteína total.

Aviso

1. Durante la lisis de tejido o células, el lisado puede volverse viscoso. Pipetee repetidamente la mezcla o agítela en vórtex hasta que se licue. Si permanece demasiado viscoso, añada la cantidad necesaria de tampón de lisis adicional.

2. Este reactivo no contiene inhibidores de proteasas. Es necesario preparar los inhibidores de proteasas por separado y añadirlos justo antes de su uso. Recomendamos utilizar los inhibidores de proteasas de nuestra empresa.

3. Por favor, use bata de laboratorio y guantes desechables durante la operación.