Solución de extracción de ARN Trizol

Introducción del producto

Información del producto:

El reactivo de extracción de ARN total es un reactivo de amplio espectro diseñado para el aislamiento de ARN total. Este reactivo es adecuado para la extracción de ARN total de tejidos animales, materiales vegetales, diversos microorganismos y células cultivadas. TRIzol lisa eficazmente las muestras, a la vez que maximiza la preservación de la integridad del ARN. Tras añadir cloroformo y centrifugar, la mezcla se separa en tres capas, con el ARN distribuido en la fase acuosa superior. Se recoge la fase acuosa y se recupera el ARN total mediante precipitación con isopropanol.

Se puede utilizar en diversos experimentos de biología molecular, como RT-PCR, PCR en tiempo real, Northern blot, Dot blot, selección de poli A, traducción in vitro y construcción de bibliotecas de ADNc.

Características del producto:

1. Diseño libre de ARNasa: El kit completo está tratado para estar libre de ARNasa, lo que garantiza un funcionamiento sin contaminación.

2. Amplia aplicabilidad: Adecuado para la extracción de ARN de varios tipos de muestras, incluidos tejidos animales, tejidos vegetales, diversos microorganismos y células cultivadas.

3. Protocolo fácil de usar: Procedimiento sencillo y eficaz, con extracción completada en aproximadamente 30 minutos.

4. Resultados de alta calidad: Preserva eficazmente la integridad del ARN, a la vez que ofrece un alto rendimiento y pureza, libre de proteínas u otros contaminantes. El ARN extraído suele presentar una relación DO260/DO280 de 1,9-2,2, lo que lo hace ideal para una amplia gama de aplicaciones de biología molecular.

Protocolo: (Por favor lea las precauciones antes de comenzar el experimento)

Procesamiento de muestras:

1.Tejido vegetal: Triture bien el tejido vegetal fresco en nitrógeno líquido o córtelo en trozos pequeños y tritúrelo directamente en TRIzol. Añada 1 ml de TRIzol por cada 50–100 mg de tejido y mezcle bien. Nota: El volumen de la muestra no debe superar el 10 % del volumen de TRIzol.

2.Tejido animal: Corte tejido animal fresco o congelado a -80 °C en trozos finos. Añada 1 ml de TRIzol por cada 30–100 mg de tejido y homogeneice con un homogeneizador. Alternativamente, triture el tejido en nitrógeno líquido, transfiéralo a un nuevo tubo de centrífuga y añada 1 ml de TRIzol para mezclar. Nota: El volumen de la muestra no debe superar el 10 % del volumen de TRIzol.

3.Células Adherentes: Lise directamente las células en la placa de cultivo añadiendo TRIzol. Añada 1 ml de TRIzol por cada 10 cm² de superficie de cultivo y pipetee repetidamente hasta que no queden grumos visibles. Una cantidad insuficiente de TRIzol puede provocar contaminación del ADN.

4.Células en suspensión: Centrifugue para recolectar las células. Añada 1 ml de TRIzol por cada 5–10×10⁶ células animales, vegetales o de levadura, o por cada 1×10⁷ células bacterianas, y mezcle bien. Pipetee repetidamente hasta que no queden grumos visibles. No lave las células para evitar la degradación del ARNm.

5.Para la extracción de ARN bacteriano: utilice el kit de extracción rápida de ARN bacteriano SpinPure™ (columna de centrifugación) (n.° de cat.: 2120).

Para la extracción de ARN de muestras de sangre o líquidas: utilice el reactivo de extracción de ARN total de muestras líquidas TRI LS (reactivo TRIzol LS) (n.° de cat.: 2107).

Procedimiento de extracción:

1.Deje reposar la muestra procesada a temperatura ambiente durante 5 a 10 minutos para garantizar la disociación completa de los complejos de nucleoproteínas.

2.Paso opcional: Centrifugar a 12 000 rpm y 4 °C durante 10 minutos y, a continuación, transferir el sobrenadante a un nuevo tubo de centrífuga sin ARNasa. (Puede requerirse una separación adicional para muestras ricas en proteínas, grasas, polisacáridos o materiales extracelulares, como músculo, tejido adiposo o partes de tubérculos de plantas).

3.Añadir 200 µl de cloroformo por cada ml de TRIzol. Agitar vigorosamente durante 15 segundos y dejar reposar a temperatura ambiente durante 3 minutos.

4.Centrifugar a 12 000 rpm y 4 °C durante 10 minutos. La muestra se separará en tres capas: una fase orgánica inferior, una capa proteica intermedia y una fase acuosa superior. El ARN se encuentra en la fase acuosa superior.

5.Transfiera la fase acuosa a un tubo de centrífuga nuevo y añada un volumen igual de isopropanol. Mezcle invirtiendo y deje reposar a temperatura ambiente durante 10 minutos. (Evite aspirar cualquier precipitado o residuo flotante. El material flotante puede adherirse a la parte exterior de la punta de la pipeta; asegúrese de que no se transfiera al tubo).

6.Centrifugue a 12 000 rpm y 4 °C durante 10 minutos y deseche el sobrenadante. Se formará un sedimento gelatinoso en el fondo del tubo.

7.Lavar el pellet con 1 ml de etanol al 75% por cada 1 ml de TRIzol utilizado y agitar en vórtex para resuspender.

8.Centrifugue a 12 000 rpm y 4 °C durante 3 minutos y deseche el sobrenadante (no altere el pellet de ARN). Si queda líquido residual, vuelva a centrifugar brevemente y aspire con cuidado con una pipeta.

9.Seque el pellet al aire a temperatura ambiente durante 2-3 minutos. Añada de 30 a 100 µl de H₂O sin ARNasa para disolver completamente el ARN. Evite secarlo demasiado, ya que esto podría dificultar su disolución. El ARN eluido puede usarse inmediatamente o almacenarse a –80 °C.